📋 实验流程
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小室准备
30 min侵袭实验先在小室上层铺基质胶凝化；迁移实验直接使用
💡 技巧 基质胶需在4℃溶解后铺用
⚠️ 注意 基质胶须预凝化否则不均
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2
细胞接种
30 min无血清饥饿后高密度种子小室上层，下层加入含趋化因子的培养基
💡 技巧 饥饿可降低背景迁移
⚠️ 注意 上下层液面齐平防重力影响
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3
迁移孵育
24–48 h培养箱孵育设定时间，让细胞穿过膜孔
💡 技巧 时间依细胞迁移能力而定
⚠️ 注意 避免培养过久细胞脱落
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4
固定染色与计数
1 h擦拭未迁移上层细胞，甲醛固定、结晶紫染色，显微镜计数穿过膜的细胞
💡 技巧 擦除上层细胞务必干净
⚠️ 注意 计数取多个视野平均
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 基质胶未充分凝胶导致侵袭假性增高
- ② 上层细胞未擦净导致计数偏高
- ③ 液面不平产生静水压差干扰结果
- ④ 未饥饿导致背景迁移过高
- ⑤ 孵育时间不当致细胞过满或过少
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+迁移与侵袭实验有何区别？
侵袭需额外铺基质胶模拟ECM降解穿透，迁移仅穿膜。
+如何定量结果？
200X视野计数细胞数，或用结晶紫溶解后比色读取OD。
+为什么细胞在下层聚集？
通常为趋化梯度吸引，属正常迁移表现，可按膜面定量。