📋 实验流程
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细胞铺板
30 min培养至对数期，以适合密度接种24孔板，转染时汇合度达60-80%
💡 技巧 不同细胞系需优化密度
⚠️ 注意 转染时用无抗生素培养基
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2
配置转染复合物
15 min分别用无血清培养基稀释脂质体和核酸，混合静置15分钟形成复合物
💡 技巧 脂质体与DNA比例是效率关键
⚠️ 注意 不能用血清稀释会抑制转染
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3
加入细胞
10 min将复合物逐滴加入孔中，轻摇混匀，培养箱培养4-6小时后换液
💡 技巧 换液可降低毒性
⚠️ 注意 动作轻柔防细胞脱落
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4
表达检测
24–48 h继续培养至目标时间，用荧光显微镜观察报告基因或WB/qPCR验证表达
💡 技巧 设空载体和未转染对照
⚠️ 注意 转染后细胞应激需多组对照
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 血清抑制脂质体转染效率
- ② 脂质体与DNA比例未优化导致效率低或毒性高
- ③ 细胞密度不当影响转染率
- ④ 转染试剂用量过大导致细胞死亡
- ⑤ 未用内参质粒校正效率
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+如何验证转染成功？
用GFP等荧光标签显微镜观察，配合WB/qPCR定量。
+转染效率低怎么办？
优化脂质体比例、细胞密度，或改用慢病毒/电转等更高效方法。
+siRNA与质粒哪个更合适？
siRNA用于瞬时敲低、作用快；质粒可过表达或稳转，需更复杂验证。