📋 实验流程
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基质/滋养层准备
1 h包被培养皿(层粘连蛋白/Matrigel)或接种滋养层细胞为干细胞提供支持
💡 技巧 基质浓度与覆盖均匀重要
⚠️ 注意 包被后充分铺展
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2
培养基与接种
30 min用含LIF等因子的无血清培养基重悬种子细胞并接种
💡 技巧 接种密度影响克隆形成
⚠️ 注意 全培养基现配防因子失效
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3
日常培养与换液
每天30 min每日更换新鲜培养基，保持适当汇合度和未分化形态
💡 技巧 监测克隆形态防自发分化
⚠️ 注意 避免过密致分化
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4
传代与冷冻
1 h用温和消化或EDTA分批传代，多余细胞加冻存液保种
💡 技巧 温和传代保持细胞全能性
⚠️ 注意 过度消化损伤全能性细胞
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 培养基或因子不当致自发分化
- ② 传代过度致核型异常或分化
- ③ 消化过度损伤细胞活性
- ④ 细胞过密促进分化
- ⑤ 污染后难清除且影响结果
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+如何判断干细胞保持未分化？
观察克隆形态规整，检测多能标志物如Nanog、Oct4表达。
+为什么需每日换液？
维持生长因子浓度并清除分化因子的代谢产物，抑制自发分化。
+滋养层还是无滋养层培养？
无滋养层使用基质和因子更可控标准化，滋养层经典但批次差异大。