📋 实验流程
全流程一览，产品可直接加购1
配体固定
1 h将配体蛋白固定在CM5等传感芯片表面，采用胺偶联或捕获法
💡 技巧 固定量适中防质传限
⚠️ 注意 配体需高纯度稳定
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
2
分析物梯度
30 min配置系列浓度的分析物(流动相)用于结合动力学测定
💡 技巧 浓度跨度覆盖KD范围
⚠️ 注意 用匹配缓冲液稀释分析物
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
3
结合-解离测量
2–4 h依次注入分析物记录结合相，再注入缓冲液观察解离相
💡 技巧 加再生步骤测多循环
⚠️ 注意 温度恒定保证动力学可靠
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4
动力学拟合
1 h用软件对传感图拟合1:1模型，计算ka/kd与平衡常数KD
💡 技巧 评估拟合残差验证模型
⚠️ 注意 多浓度全局拟合更可靠
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 配体固定量过高致质传限制
- ② 缓冲液不匹配导致非特异结合
- ③ 样品进气泡干扰传感图
- ④ 分析物浓度覆盖不足难拟合
- ⑤ 温控不稳导致动力学漂移
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+SPR能测KD吗？精度如何？
能，SPR实时测ka/kd并算KD，为互作定量金标准之一。
+配体固定方式怎么选？
小分子用捕获或定向固定，蛋白常用胺偶联，功能性对照需谨慎。
+测小分子需要什么装置？
需高灵敏度可测小分子的SPR系统并获得高质量配体。