📋 实验流程
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单细胞悬液制备
1 h轻柔解离组织或培养细胞为高活力单细胞悬液
💡 技巧 活力与成团控制关键
⚠️ 注意 避免过度解离损伤或转录反应
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2
微滴分装与条码标记
1 h用微流控平台将单细胞与含条码的凝胶珠分装入微滴
💡 技巧 目标每细胞捕获数千转录本
⚠️ 注意 按浓度控制细胞-微珠比例
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3
文库构建与测序
1–3 天细胞内cDNA加条码与接头后扩增，构建文库测序
💡 技巧 深度按细胞数调整
⚠️ 注意 防样本间条码污染
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4
数据降维与聚类
1 天质控、定量并按条码拆分细胞，降维聚类鉴定细胞类群
💡 技巧 用标记基因注释细胞群
⚠️ 注意 去除双胞与低质量细胞
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 细胞活力低致数据质量差
- ② 双胞或空滴干扰分析
- ③ 解离诱导转录组改变
- ④ 测序深度不足漏低表达
- ⑤ 批次效应混淆细胞鉴定
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+单细胞和bulk测序区别？
单细胞分离各细胞表达揭示异质性，bulk给群体平均表达。
+如何鉴定细胞类型？
用已知标记基因注释聚类分群并参照已有图谱。
+如何去除双胞？
用软件按UMI/基因数等方法预测并过滤双胞事件。