📋 实验流程
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分析方法开发
1 h先用分析型色谱柱确定最优流动相、梯度与分离度。
💡 技巧 分离度R>1.5再放大到制备柱
⚠️ 注意 小流速结论直接放大会过载
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
2
样品制备与溶解
20 min用尽量少的起始流动相溶解样品,必要时过滤。
💡 技巧 用起始流动相溶解峰形更尖
⚠️ 注意 残留大颗粒会堵死制备柱
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3
制备进样与分离
1–3 h在制备柱上进样,按开发条件运行,检测器触发收集目标峰。
💡 技巧 用二极管阵列或MS辅助切峰
⚠️ 注意 一次进样量过大,峰重叠
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4
馏分收集与浓缩
40 min自动收集器分批接取,合并同峰馏分旋干去溶剂。
💡 技巧 减压旋干保护热敏感产物
⚠️ 注意 旋干太猛会损失样品
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5
纯度复核
20 min用分析型HPLC进样复核纯度,必要时LC-MS确认。
💡 技巧 纯度>95%通常可直接用于后续
⚠️ 注意 UV测不到杂质不等于没有
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 分析放大时未按比例调柱径流速
- ② 进样过载导致峰重叠
- ③ 切峰太宽混入杂质峰
- ④ 样品未过滤堵柱
- ⑤ 溶剂挥发损失样品
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+纯化量和分离度怎么权衡?
分离度R>1.5时加大进样量,否则减量。
+怎么把小柱方法放大?
按柱径平方比放大流速与进样量。
+收集到杂质怎么办?
重跑一次该峰段或微调梯度再切。