📋 实验流程
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基质胶铺设
1 h将干细胞与Matrigel混合滴入孔中凝胶化，形成三维环境
💡 技巧 Matrigel在冰上操作防凝胶
⚠️ 注意 均匀分散细胞防聚集
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2
类器官培养基
30 min加入含Wnt、R-spondin、Noggin等因子的类器官培养基
💡 技巧 因子组合依组织类型定制
⚠️ 注意 培养基现配保因子活性
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3
长期培养与传代
2–6 周定期换液，类器官长到合适大小后机械或酶法破碎传代再包被
💡 技巧 传代保结构和干性
⚠️ 注意 过度传代致分化或丢失干性
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4
验证与功能分析
1–2 天用免疫荧光、组织切片和功能检测验证类器官结构与功能
💡 技巧 多谱系标志物确认分化
⚠️ 注意 注意致瘤或异常增生性残留
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① Matrigel批次差异影响形成率
- ② 因子组合或浓度不当致分化异常
- ③ 传代过度致结构或干性丢失
- ④ 中心坏死或缺氧抑制生长
- ⑤ 污染或批次不稳定致失败
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+类器官如何长期维持？
定期换液、及时传代再包被、保持因子组合与低吸附环境。
+为什么用Matrigel？
提供类似基底膜的细胞外基质，支持三维自组织与细胞极性。
+能否用类器官做药筛？
可以，类器官保留患者特异性和组织差异性，适合药效与个体化评价。