📋 实验流程
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合成柱与首核苷酸
30 min选择合适合成柱(以3'首核苷酸预载)进行固相合成
💡 技巧 柱规格按合成量选择
⚠️ 注意 保持无水环境
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
2
逐步偶联循环
数小时按设计序列重复脱保护-偶联-氧化等循环逐步延长
💡 技巧 偶联效率与纯度相关
⚠️ 注意 各步骤试剂需新鲜无水
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3
脱保护与切割
2–4 h用氨等碱处理后从载体切割并去除碱基保护基
💡 技巧 RNA需特殊脱保护
⚠️ 注意 温度时间按序列优化
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4
纯化与质检
数小时用PAGE或HPLC纯化寡核苷酸，质谱验证序列长度与纯度
💡 技巧 溶解后测OD260定量
⚠️ 注意 长链或修饰寡核苷酸需精纯化
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 偶联不完全致缺失序列
- ② 潮解或试剂失活致产量低
- ③ 丢弃硫代修饰或碱基缺失
- ④ 纯化不足致序列污染
- ⑤ RNA易降解需RNase-free
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+合成的引物如何定量？
溶解后测OD260，按消光系数换算浓度与摩尔量。
+长链寡核苷酸纯度低怎么办？
用PAGE或离子对反相HPLC精纯化去除缺失序列。
+能否合成带修饰的寡核苷酸？
可以，硫代、荧光、生物素与2'-修饰等均可通过对应单体引入。