📋 实验流程
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设计修饰方案
1 h按应用选择修饰位点与类型(末端、内部、特定基团)
💡 技巧 修饰位置影响功能与稳定性
⚠️ 注意 需平衡修饰度与生物活性
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2
选择修饰单体
30 min选择硫代磷酸、2'-OMe/LNA、荧光等修饰亚磷酰胺单体
💡 技巧 单体纯度决定链质量
⚠️ 注意 修饰单体取用干燥防潮
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3
合成与引入修饰
数小时-1天在寡核苷酸合成中按序引入修饰单体或进行位点特异性偶联
💡 技巧 修饰位置按合成循环设置
⚠️ 注意 监测合成偶联效率
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4
纯化与性能验证
1 天纯化修饰产物,验证修饰位点、结构并检测稳定性/活性
💡 技巧 质谱确认修饰存在
⚠️ 注意 修饰可能影响退火或杂交
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误(避坑指南)
- ① 修饰过度影响杂交/活性
- ② 修饰位置不当影响功能
- ③ 单体纯度不足致链缺损
- ④ 修饰后难纯化或质检
- ⑤ 偶联不完全致标记缺失
❓ 常见问题(做坏了怎么办)
+硫代修饰有何用?
提高核酸酶抗性和体内稳定性,常见于反义或siRNA。
+如何确认修饰成功?
用质谱确认分子量变化与修饰位点特征碎片。
+修饰影响杂交怎么办?
选择对退火影响小的修饰(如LNA提高亲和力)并优化序列。