📋 实验流程
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样本裂解
15 min加入含裂解缓冲液处理后裂解细胞/组织，释放核酸并抑制核酸酶
💡 技巧 RNA提取需在RNase-free环境
⚠️ 注意 冻存组织应研磨充分
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2
结合核酸
10 min加入异丙醇调节后上样到离心柱或磁珠上，使核酸吸附
💡 技巧 高盐条件促进硅胶吸附
⚠️ 注意 RNA和DNA提取缓冲液不同
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3
洗涤
10 min用含乙醇的洗涤缓冲液多次洗涤，去除蛋白、盐和杂质
💡 技巧 洗涤需彻底但避免过度干燥
⚠️ 注意 过度干燥使核酸难以洗脱
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4
洗脱与质检
15 min加无核酸酶水或洗脱液回收核酸，测OD260/280和浓度评估纯度
💡 技巧 A260/280 RNA约2.0、DNA约1.8
⚠️ 注意 检查完整性(RNA电泳/基因片段)
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① RNA被RNase降解导致完整性差
- ② DNA被残留污染蛋白/盐
- ③ 洗脱体积过小或过度干燥导致得率低
- ④ 样本研磨不充分导致提取不彻底
- ⑤ 乙醇残留影响下游酶反应
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+RNA和DNA可以同时提取吗？
可用总核酸提取然后分别纯化，或选用同时回收的试剂盒。
+A260/280比值偏高说明什么？
偏高多为残留有机物如酚或乙醇污染，需进一步纯化。
+如何避免RNA降解？
全程冰上操作、用RNase-free耗材、裂解液中含RNase抑制剂并在-80℃保存。