📋 实验流程
全流程一览，产品可直接加购1
核酸片段化
30 min用酶法或超声将纯化核酸片段化为合适大小
💡 技巧 片段大小决定后期读长与数据量
⚠️ 注意 片段化需均匀且避免降解
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
2
末端修复与加A
1 h修复末端并把平末端加A，为连接接头做准备
💡 技巧 末端修复质量影响连接效率
⚠️ 注意 避免过量导致产物丢失
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
3
接头连接与条码
1 h连接测序接头(含条码)，纯化去除游离接头
💡 技巧 条码区分多样本
⚠️ 注意 多接头连接受载体交叉污染
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
4
扩增与质检
2 hPCR富集文库，纯化后用定量(qPCR/芯片)和Bioanalyzer质检
💡 技巧 循环数控制防过度扩增偏差
⚠️ 注意 文库浓度定量准确才能正确混合
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① RNA/DNA降解导致文库质量差
- ② 接头污染导致低复杂度数据
- ③ 扩增循环过多引入PCR偏差
- ④ 文库定量不准影响混合与均一性
- ⑤ 交叉污染导致样本条形码串扰
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+文库质量如何判断？
看浓度、片段大小分布单一峰且无接头峰，qPCR中靶率达标。
+测序深度要求多少？
依应用而定，如RNA-seq 20-50M/样本，WGS 30×基因组。
+文库可以长期保存吗？
宜-20℃短期保存并尽快测序，避免反复冻融降解。