📋 实验流程
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铺板接种
30 min对数期细胞消化计数，以合适密度接种96孔板，边缘孔加PBS防蒸发
💡 技巧 密度以实验结束时对照不铺满为原则
⚠️ 注意 接种后显微镜下确认均匀
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
2
药物处理
24–72 h加入梯度浓度化合物，设阴性/阳性对照，置于培养箱培养
💡 技巧 每浓度设3-6复孔
⚠️ 注意 溶剂DMSO浓度保持一致且≤0.5%
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3
加入MTT孵育
2 h弃培养液，加入MTT溶液，37℃避光孵育2-4小时至产生甲臜结晶
💡 技巧 避光防MTT光降解
⚠️ 注意 孵育时间过长结晶过多不易溶解
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4
溶解与比色
30 min弃上清，加DMSO溶解结晶，酶标仪570nm读取吸光度
💡 技巧 轻摇混匀避免气泡
⚠️ 注意 设置630nm参考波长减背景
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 贴壁细胞漂移导致OD不均
- ② 边缘孔蒸发导致假性高活力
- ③ MTT见光降解降低灵敏度
- ④ DMSO浓度过高本身毒害细胞
- ⑤ 未减参考波长导致读数偏高
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+MTT与CCK-8有何区别？
MTT需溶解结晶、有细胞毒性、操作多步；CCK-8水溶更灵敏、可连续监测。
+细胞密度如何确定？
以对数生长期且在实验周期内不达汇合为原则，通常96孔板3000-10000/孔。
+OD值超出量程怎么办？
减少细胞接种量或缩短孵育时间，使读数落在线性范围(约0.2-1.2)。