📋 实验流程
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代谢物灭活提取
1 h快速灭活细胞/组织后用有机溶剂沉淀蛋白提取代谢物
💡 技巧 快速灭活防代谢物降解
⚠️ 注意 加内标提高定量
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2
分离与质谱检测
数小时用正负离子模式的液相-质谱或核磁分离鉴定代谢物
💡 技巧 正负离子模式覆盖广谱
⚠️ 注意 稳定进样防保留时间漂移
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3
数据处理与峰对齐
2 h进行峰检测、对齐和归一化，生成特征表
💡 技巧 正确归一化减少偏差
⚠️ 注意 去掉缺失和异常值
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4
差异代谢物与通路分析
1 天用PCA/OPLS-DA筛选差异代谢物并做通路富集与鉴定
💡 技巧 离子注释和标准验证鉴定
⚠️ 注意 鉴定的不确定需验证
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 提取不标准化致定量偏差
- ② 延迟灭活致代谢物降解
- ③ 保留时间漂移致对齐错误
- ④ 批次效应混淆差异
- ⑤ 代谢物鉴定不充分致误判
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+靶向和非靶向代谢组有何区别？
非靶向广探未知；靶向精确定量已知代谢物更可靠。
+如何鉴定未知代谢物？
用标准品保留时间/质谱比对，结合数据库和MS/MS验证。
+为什么用正负离子两种模式？
不同代谢物在某一极性下电离更佳，双模式提高覆盖。