📋 实验流程
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样本固定与通透
30 min用多聚甲醛固定细胞或切片，Triton X-100通透暴露胞内抗原
💡 技巧 膜/胞内抗原通透条件不同
⚠️ 注意 过度通透损伤形态
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
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一抗孵育
过夜孵育针对靶蛋白的荧光/未标记一抗，可多色同时标记
💡 技巧 多色选来源不同一抗
⚠️ 注意 避免交叉反应影响共定位
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
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二抗与成像
2 h孵育不同荧光素标记的二抗，DAPI复染后荧光/共聚焦成像
💡 技巧 二抗与一抗种属匹配
⚠️ 注意 全程避光防淬灭
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 二抗种属不匹配导致无信号或交叉
- ② 封闭不足致背景荧光高
- ③ 多色之间的光谱重叠影响共定位
- ④ 荧光淬灭导致信号随时间衰减
- ⑤ 缺阴性对照难判特异性
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+IF与IHC有何区别？
IF用荧光直接观测和共定位，IHC用酶显色适合形态学与存档。
+如何进行定量分析？
用共聚焦和图像分析软件测定荧光强度、定位与共定位系数。
+多色标记注意什么？
选光谱分离的染料、来源不同的一抗并设置单色对照。