📋 实验流程
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细胞裂解与组蛋白提取
1 h裂解细胞并提取组蛋白，可酸提取富集
💡 技巧 加去乙酰化酶抑制剂防丢失修饰
⚠️ 注意 低温快速防组蛋白降解
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2
蛋白定量与分离
2 h定量后SDS-PAGE或酸-尿素凝胶分离组蛋白
💡 技巧 组蛋白小而带正电需专用凝胶
⚠️ 注意 上样等量保可比
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3
修饰抗体检测
1 天用特异性组蛋白修饰抗体免疫印迹检测各修饰水平
💡 技巧 用总组蛋白或HN3作输入对照
⚠️ 注意 抗体特异性须验证
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4
ChIP与基因组分布(可选)
2–4 天交联后超声切断染色质，用修饰抗体免疫沉淀并结合qPCR或测序
💡 技巧 设置IgG阴性对照
⚠️ 注意 超声片段化均匀且不降解
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 去乙酰化酶未抑制致修饰丢失
- ② 抗体验证不足致非特异富集
- ③ 超声过度或不足影响ChIP
- ④ 定量误差致组蛋白上样不均
- ⑤ 缺输入或IgG对照难定富集
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+组蛋白修饰如何定量？
免疫印迹定量或ChIP-qPCR/CUT&Tag定量相对水平，全局用质谱。
+为什么需验证抗体特异性？
组蛋白修饰抗体易交叉反应，须用肽、突变或细胞处理验证。
+ChIP与CUT&Tag有何区别？
ChIP需大量细胞和超声，CUT&Tag量少、灵敏、信噪比高。