📋 实验流程
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样本制备与预处理
2 h细胞或组织切片固定后，蛋白酶消化提高探针可及性
💡 技巧 蛋白酶消化时间依样本优化
⚠️ 注意 过度消化破坏形态信号差
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2
探针杂交
过夜变性后加入荧光标记探针，在合适温度下杂交过夜
💡 技巧 杂交温度依探针GC与长度
⚠️ 注意 探针量适中防背景
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3
洗涤去除未结合探针
1 h用严格性递增的洗涤液洗去非特异结合探针
💡 技巧 严格性洗涤提升信噪比
⚠️ 注意 洗涤过度会丢失信号
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4
复染与成像
30 minDAPI复染细胞核，荧光显微镜或共聚焦成像并分析荧光信号
💡 技巧 DAPI定位各染色体及核形态
⚠️ 注意 防褪色封片剂有助于成像
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 蛋白酶消化过度破坏细胞形态
- ② 杂交温度或缓冲不当导致信号弱
- ③ 洗涤过度丢失特异性信号
- ④ 探针与靶序列不匹配导致假阴性
- ⑤ 荧光淬灭影响定量
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+FISH与PCR检测有何不同？
FISH提供原位定位与拷贝数，PCR更灵敏但需裂解提取DNA。
+如何提高信号强度？
优化消化、延长杂交时间或使用信号放大系统(如TSA)。
+能否同时检测多个靶标？
可以，用多色探针或将探针与不同荧光素标记在同一张片。