📋 实验流程
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样本制备
1 h制备单细胞悬液，计数并调整密度，细胞应成单分散
💡 技巧 去除细胞团和碎片
⚠️ 注意 细胞活力影响染色与散射
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2
抗体染色
1 h加荧光标记抗体，4℃避光孵育，洗涤去除游离抗体
💡 技巧 设同型对照和单染对照
⚠️ 注意 全程避光防淬灭
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3
上机检测
1 h设置激光与荧光通道，调整电压，上机采集并记录事件
💡 技巧 先跑对照再校正补偿
⚠️ 注意 上样速度适中防粘连
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4
数据分析
1 h用软件设门去除碎片与粘连，量化各细胞亚群比例和荧光强度
💡 技巧 门策略一致性保证可比
⚠️ 注意 记录门控流程便于复现
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 细胞成团导致粘连事件干扰分析
- ② 补偿设置错误导致荧光串色假阳性
- ③ 染色缓冲液含EDTA影响某些标记
- ④ 抗体用量不当导致弱信号或非特异结合
- ⑤ 荧光淬灭导致信号衰减
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+如何选择荧光染料搭配？
选择发射谱分开、补偿少的组合，并匹配仪器激光配置。
+什么叫设门？
用散射和荧光特征圈定目标细胞亚群，排除碎片和粘连。
+能否同时分选细胞？
FACS可结合分选功能，按门把目标细胞物理分离用于下游培养或分析。