📋 实验流程
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制胶
30 min用琼脂糖(核酸)或聚丙烯酰胺(蛋白)配制凝胶,插梳子成型
💡 技巧 胶浓度按片段大小选择
⚠️ 注意 琼脂糖加热溶解摇匀防气泡
🧪 这一步需要的耗材(点「去选购」到产品页选规格/品牌)
2
上样
10 min样本与上样缓冲液混匀,连同DNA Marker一起加入泳道
💡 技巧 Marker用于大小定性
⚠️ 注意 上样量保持一致可比
🧪 这一步需要的耗材(点「去选购」到产品页选规格/品牌)
3
电泳
30–60 min在电泳槽中加电泳缓冲液,设定电压电流运行至前沿到达合适位置
💡 技巧 电压过高导致条带模糊
⚠️ 注意 注意电极方向防跑反
🧪 这一步需要的耗材(点「去选购」到产品页选规格/品牌)
4
染色与成像
20 min用核酸染料或蛋白染色剂染色,紫外或凝胶成像系统拍照
💡 技巧 选择低毒安全核酸染料
⚠️ 注意 UV伤眼需防护
🧪 这一步需要的耗材(点「去选购」到产品页选规格/品牌)
⚠️ 新手常犯的 5 个错误(避坑指南)
- ① 胶浓度不匹配导致片段分离差
- ② 电压过高导致条带扩散模糊
- ③ 上样量过大导致过载拖尾
- ④ 缓冲液重复使用电导改变
- ⑤ 电极接反导致样本跑出胶外
❓ 常见问题(做坏了怎么办)
+如何选择胶浓度?
核酸小片段选高浓度琼脂糖,大片段选低浓度(<1%),蛋白用SDS-PAGE梯度胶。
+条带模糊拖尾怎么办?
降低电压、减少上样量、用新鲜缓冲液并保证胶均匀。
+DNA Marker跑出去如何找齐?
缩短电泳时间或推迟观察,按染料前沿预判Marker位置。