📋 实验流程
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基因组DNA提取与质检
2 h提取基因组DNA并检测浓度、纯度与完整性
💡 技巧 高质量的DNA保证转化完整
⚠️ 注意 降解或污染的DNA影响结果
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2
亚硫酸盐转化
3–4 h用亚硫酸盐处理DNA使未甲基化C脱氨为U，纯化回收
💡 技巧 转化效率是检测关键
⚠️ 注意 严格控制条件防降解
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3
PCR扩增与检测
2–3 h设计甲基化特异引物PCR，或用BSP方法测序及荧光定量
💡 技巧 引物区分甲基化/未甲基化序列
⚠️ 注意 设甲基化和未甲基化对照
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4
结果分析
1 h对照标准计算甲基化程度，或比对序列确定每个CpG甲基化状态
💡 技巧 多CpG位点综合评估
⚠️ 注意 全基因组范围需专用方法
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 亚硫酸盐转化不完全致假甲基化
- ② DNA降解导致转化与扩增失败
- ③ 引物不特异扩增背景
- ④ 缺对照难定量
- ⑤ 脱氨过度致甲基化丢失
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+什么是甲基化特异PCR(MSP)？
用特异性引物区分甲基化和非甲基化序列的PCR方法，简单定性。
+如何衡量转化效率？
用已知非CpG胞嘧啶作为内部对照，验证其全部转化为T。
+全基因组甲基化测序怎么做？
用WGBS(全基因组亚硫酸盐测序)或甲基化芯片覆盖全基因组范围。