📋 实验流程
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单细胞化
30 min将多能干细胞温和消化为单细胞并铺板至适合密度启动分化
💡 技巧 加ROCK抑制可提高存活
⚠️ 注意 单细胞化充分均匀分群
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2
阶段式因子处理
1–4 周按时序加入Wnt激活/抑制、FGF、小分子等设定分化路径
💡 技巧 各阶段因子浓度与时序优化
⚠️ 注意 时机错位导致分化失败或畸变
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3
分化检测
1–2 天用免疫荧光或多个特异标志物qPCR验证目标细胞身份与纯度
💡 技巧 多标志物交叉确认
⚠️ 注意 评估杂细胞与未分化残留
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4
成熟与纯化
1–2 周延长培养促进成熟，用流式或磁珠分选富集目标细胞
💡 技巧 成熟时间依细胞类型而不同
⚠️ 注意 成熟期需适宜营养与信号
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 因子时序错乱致分化方向错误
- ② 密度或基质不适影响分化效率
- ③ 成熟不足功能性差
- ④ 残留未分化细胞致致瘤风险(应用)
- ⑤ 批次间分化效率不稳定
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+如何提高分化效率？
优化阶段因子浓度/时序、单细胞化、基质和成熟条件。
+用什么验证分化成功？
用该谱系特异标志物免疫荧光和qPCR，检测形态与功能终点。
+分化中细胞死亡多怎么办？
优化因子浓度与换液、加存活因子或ROCK抑制并控制传代过紧。