📋 实验流程
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抗体准备
30 min高纯度抗体置换到偶联适宜缓冲液，去除赋形剂
💡 技巧 需高纯度无BSA抗体
⚠️ 注意 含稳定剂会干扰偶联
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2
偶联反应
1–2 h按比例加入活化标记物(荧光/酶/药物)，室温避光反应
💡 技巧 优化摩尔比控制标记度
⚠️ 注意 避光防荧光标记物降解
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3
纯化与去除游离标记
1 h用凝胶过滤或超滤去除未结合的游离标记物和副产物
💡 技巧 彻底去游离标记提高质量
⚠️ 注意 过度洗脱导致抗体损失
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4
标记度检测与验证
30 min测抗体与标记物浓度计算标记(DOL)，并通过结合实验验证活性
💡 技巧 标记度合适保活性与信号平衡
⚠️ 注意 过度标记损害抗原结合
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 抗体含稳定剂干扰偶联效率
- ② 标记度(摩尔比)过高损害活性
- ③ 游离标记未去除引起背景
- ④ 荧光见光降解降低信号
- ⑤ 未验证结合活性盲目使用
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+什么是标记度(DOL)？
每个抗体分子上偶联的标记分子数，影响信号强度与活性平衡。
+如何选择偶联位点？
赖氨酸偶联常见但随机；半胱氨酸或定点偶联更可控，去ADC需均一。
+偶联后抗体活性下降怎么办？
降低标记度、保护抗原结合位点或选定向偶联策略。