📋 实验流程
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靶细胞准备
1 h培养靶细胞并标记，计数后重悬于合适密度
💡 技巧 载入染料或放射性标记便于检测裂解
⚠️ 注意 细胞活力高保证结果可靠
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2
抗体致敏
30 min靶细胞与大量抗体孵育使其致敏，为补体激活做准备
💡 技巧 抗体过量保证饱和致敏
⚠️ 注意 洗涤去游离抗体控制本底
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3
补体处理
1 h加入补充体来源(人/兔血清)孵育激活裂解
💡 技巧 补体效价与稳定性需质控
⚠️ 注意 补体需冷链保存防失活
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4
裂解检测
1 h取上清测释放的标记物，或活细胞染色计算裂解率
💡 技巧 设自发释放和最大释放对照
⚠️ 注意 背景释放高会掩盖差异
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 补体失活导致假阴性
- ② 自发释放高掩盖补体活性
- ③ 抗体不足导致裂解不敏感
- ④ 补体浓度过高致非特异裂解
- ⑤ 缺最大释放对照难算裂解率
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+哪些对照必要？
自发释放(无补体)、最大释放(裂解剂)和无抗体对照均须设置。
+如何提高补体裂解效率？
优化抗体密度、补体效价和靶细胞敏感性，用匹配的补体来源。
+活性血清如何贮存？
新鲜取用或-80℃分装避免反复冻融和热灭活。