📋 实验流程
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装柱与压实
30 min干法或湿法装硅胶柱,敲实至无气泡。
💡 技巧 预先润湿压实,分离更均匀
⚠️ 注意 气泡会导致流速不均、拖尾
🧪 这一步需要的耗材(点「去选购」到产品页选规格/品牌)
2
上样
15 min粗产物溶于少量溶剂,沿壁缓慢加到柱顶沉积层。
💡 技巧 干拌硅胶上样更省溶剂
⚠️ 注意 上样量太大会过载,分离变差
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3
梯度洗脱与收集
1–2 h用极性递增的溶剂洗脱,分部收集于试管。
💡 技巧 TLC先定好洗脱梯度
⚠️ 注意 流量过大会压缩分离度
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4
合并与浓缩
30 minTLC合并含单一产物的管,旋干得纯品。
💡 技巧 合并后称重,算回收率
⚠️ 注意 勿把含杂质的边缘管并入
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误(避坑指南)
- ① 硅胶装不平,流速边偏
- ② 上样过载,拖尾分不开
- ③ 洗脱梯度太陡,杂质混在一起
- ④ 没有用TLC确认,把杂质并进产物
- ⑤ 溶剂未干上柱,分离宽度变差
❓ 常见问题(做坏了怎么办)
+怎么判断洗脱梯度?
先做TLC确定位移比,选Rf在0.2-0.3的混合溶剂。
+硅胶可以重复用吗?
一般不建议,吸附杂质会残留,除非严格活化。
+柱子堵了怎么办?
多为样品析出或气泡,可用加压或轻敲解决。