📋 实验流程
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细胞收集固定
1 h收集细胞并洗涤，逐滴加入预冷70%乙醇固定，4℃过夜
💡 技巧 逐滴加乙醇并涡旋防成团
⚠️ 注意 固定越充分染色越均匀
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
2
染色前处理
30 minPBS洗涤去除乙醇，加RNA酶去除RNA干扰
💡 技巧 RNA酶必须充足否则RNA拖尾
⚠️ 注意 洗涤需彻底防止乙醇残留
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3
PI染色
30 min加入PI染液，室温避光孵育30分钟
💡 技巧 避光防荧光淬灭
⚠️ 注意 PI浓度过高血浆易析出
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4
流式检测与拟合
1 h上机检测，用软件去除粘连细胞并拟合G1/S/G2峰
💡 技巧 上样速度放慢降低CV
⚠️ 注意 去除粘连是定量准确关键
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 乙醇固定过猛导致细胞聚集
- ② RNA酶不足导致RNA拖尾干扰拟合
- ③ 未去除粘连细胞导致G2/S比例虚高
- ④ PI背景荧高致CV变大
- ⑤ 固定前细胞死亡干扰周期分布
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+如何区分S期与G2/M期？
按DNA含量峰检测，S期连续分布，G2/M为G1两倍的峰。
+CV值多大算好？
通常CV<5%为佳，过大说明染色不均或固定差。
+能否检测细胞同时测凋亡？
固定会破坏Annexin V结合，需单独批次或用其他标记。