📋 实验流程
全流程一览,产品可直接加购1
T细胞分离激活
1–2 天从PBMC分离T细胞,用抗CD3/CD28磁珠激活
💡 技巧 激活剂与IL-2支持扩增
⚠️ 注意 无菌操作防污染
🧪 这一步需要的耗材(点「去选购」到产品页选规格/品牌)
2
CAR基因转导
1 天用慢病毒或电转将CAR表达载体导入激活的T细胞
💡 技巧 MOI与转导条件优化
⚠️ 注意 转导后细胞应激需恢复
🧪 这一步需要的耗材(点「去选购」到产品页选规格/品牌)
3
扩增与培养
1–2 周在含IL-2等细胞因子的培养基中扩增CAR-T细胞至目标数量
💡 技巧 监测扩增与活力
⚠️ 注意 控制细胞密度与营养
🧪 这一步需要的耗材(点「去选购」到产品页选规格/品牌)
4
质量检测与回输
1 天检测CAR表达率、扩增倍数和杀伤活性,达标后洗涤回输
💡 技巧 流式定量CAR表达
⚠️ 注意 回输前细菌/内毒素质控
🧪 这一步需要的耗材(点「去选购」到产品页选规格/品牌)
⚠️ 新手常犯的 5 个错误(避坑指南)
- ① T细胞来源活力差扩增不足
- ② 转导效率低致CAR表达不足
- ③ 过度培养致T细胞耗竭
- ④ 污染或质控不过关
- ⑤ kill活性验证不足影响疗效
❓ 常见问题(做坏了怎么办)
+CAR-T的杀伤靶点如何选择?
选肿瘤高表达且正常组织低表达的抗原如CD19、BCMA以降低脱靶毒性。
+如何避免T细胞耗竭?
控制扩增时长和密度,优化细胞因子配方并维持早期记忆表型。
+自体与通用CAR-T区别?
自体制备个体化但周期长;通用(健康供体)即用型但需免疫抑制和低排毒。