📋 实验流程
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制备标准曲线
15 min用BSA标准品配置梯度稀释,建立浓度-吸光度标准曲线
💡 技巧 标准品质控质量决定准确性
⚠️ 注意 与样本同一缓冲液体系
🧪 这一步需要的耗材(点「去选购」到产品页选规格/品牌)
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配置BCA工作液
10 min按比例混合A液与B液,避光保存于室温
💡 技巧 现配现用防降解
⚠️ 注意 避光防止显色不均
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加样与孵育
30 min样本与工作液混合,37℃孵育30分钟显色
💡 技巧 过浓样本需稀释并计入稀释因子
⚠️ 注意 含还原性试剂会干扰显色
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比色与计算
10 min酶标仪562nm读取,对照标准曲线计算样本浓度
💡 技巧 样本落在曲线线性范围内
⚠️ 注意 空白扣除背景
🧪 这一步需要的耗材(点「去选购」到产品页选规格/品牌)
⚠️ 新手常犯的 5 个错误(避坑指南)
- ① 含还原剂(如DTT)干扰显色
- ② 去污剂浓度过高干扰反应
- ③ 标准曲线与样本缓冲液不匹配
- ④ 样本浓度超出线性范围
- ⑤ 工作液见光降解导致显色不均
❓ 常见问题(做坏了怎么办)
+BCA与Bradford有何区别?
BCA耐受大部分去污剂且更稳健,Bradford对去污剂敏感但更快。
+含还原剂怎么测定?
改用去还原剂干扰的Bradford法,或先将还原剂稀释/去除。
+高低样本精度如何兼顾?
高浓度稀释、低浓度增大加样并落在曲线中间线性段最准。