📋 实验流程
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体外代谢孵育
2–4 h将药物与肝微粒体或肝细胞和辅因子(NADPH)孵育多个时间点
💡 技巧 设无NADPH和无蛋白对照
⚠️ 注意 蛋白浓度与底物浓度需优化
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2
终止与样品制备
1 h加入有机溶剂终止反应并沉淀蛋白，离心取上清
💡 技巧 加内标提高定量精度
⚠️ 注意 样品在冰上快速处理防降解
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3
LC-MS分析
2–4 h用液相色谱-质谱分离并定量母药和代谢物
💡 技巧 MRM模式提高灵敏度
⚠️ 注意 方法学验证保定量可靠
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4
数据计算与评价
2 h计算代谢半衰期、清除率和固有清楚率，评价代谢稳定性
💡 技巧 结合体内PK数据综合研判
⚠️ 注意 多物种可预测性需评估
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① 蛋白或辅因子浓度不当致代谢率偏差
- ② 孵育时程不足难计算半衰期
- ③ 基质效应干扰质谱定量
- ④ 代谢物不到标准难以全面解析
- ⑤ 体外外推体内预测性考验
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+肝微粒体和肝细胞有何区别？
微粒体富集I相酶代谢快，肝细胞保留I/II相及转运更整体。
+代谢稳定性差怎么办？
结构优化封代谢软位点、降低亲脂性或前药策略改善。
+什么是清除率？
单位时间内从体内清除药物的体量，决定给药频率和稳态暴露。