📋 实验流程
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抗体与药物偶联
1 天通过连接子将细胞毒药物偶联到抗体半胱氨酸或赖氨酸残基
💡 技巧 控制药物抗体比(DAR)
⚠️ 注意 偶联条件温和保抗体活性
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2
纯化与DAR测定
1–2 天纯化ADC去除游离药物，用质谱或UV测DAR与聚集状态
💡 技巧 DAR适中平衡疗效与毒性
⚠️ 注意 避免聚集和游离药物残留
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3
结合与内吞验证
1 天用流式或ELISA检测ADC与抗原结合，并验证抗原介导的内吞
💡 技巧 结合特异性和亲和力验证
⚠️ 注意 内吞实验需合适对照
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4
体外与体内杀伤评价
1–4 周测ADC对肿瘤细胞的细胞毒IC50，并评价异种移植模型抑瘤
💡 技巧 靶阳/靶阴性对照评价选择性
⚠️ 注意 药效要结合毒性评价
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⚠️ 新手常犯的 5 个错误（避坑指南）
- ① DAR过高致毒性或聚集
- ② 连接子不稳致药物早释毒性
- ③ 偶联损伤抗体活性
- ④ 靶点选择性不好致脱靶毒
- ⑤ 游离药物残留干扰结果
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+什么是DAR？
平均每个抗体偶联的药物数，影响疗效与毒性平衡。
+连接子选择有何讲究？
可分可裂解与不可裂解，可裂解依内体pH或酶降解释药，稳定性影响安全。
+如何提高ADC疗效？
优化DAR、选择选择性靶点、稳定连接子和高效内吞及药物毒性。